Različitost bakterijskih infekcija zahtijeva jasnu identifikaciju patogena i definiciju njegove vrste. U određivanju vrste mikroorganizma mikrobiolozima pomažu njegova tinktorijalna svojstva - osjetljivost mikroba na bojenje raznim bojama. Ova metoda vam omogućuje da istražite morfologiju patogena. Tinktorijalna svojstva bakterija od velike su važnosti za praktična i teorijska istraživanja u području mikrobiologije.
Istraživanje mikroba
U bakteriologiji postoji mnogo metoda za bojenje mikroorganizama. Svi se temelje na tinktorijalnim svojstvima bakterija. Bojenje vam omogućuje da odredite njihov oblik, strukturu, veličinu, relativni položaj. To omogućuje rješavanje problema sistematizacije vrsta mikroorganizama opće biologije i komparativne mikrobiologije.
Zašto ih slikati
Bakterije su praktičkiprozirnim organizmima, a bez upotrebe bojenja, slabo su vidljivi za konvencionalnu mikroskopiju. Za proučavanje objekata možete koristiti posebne vrste mikroskopije (fazni kontrast, tamno polje), ali najlakši način je bojenje, nakon čega bakterije postaju vidljive u konvencionalnom svjetlosnom mikroskopu.
Priprema uzorka
Bez obzira na korištenu tehniku bojenja, postoje jedinstvena pravila za pripremu predmeta koji se proučava. Sljedeće faze su obavezne:
- Sterilni instrumenti prave mrlju na stakalcu.
- Uzorak se suši. To se radi na sobnoj temperaturi ili pomoću ormarića za sušenje.
- Slijedi faza fiksacije - mikroorganizmi se pričvršćuju na staklo posebnim spojevima.
- Pravilno bojenje - uzorak je prekriven bojom na određeno vrijeme, nakon čega se ispere.
- Završno sušenje - uzorak se ponovno suši.
Najčešće boje
Najčešće korištene boje temeljene su na anilinu s različitim kiselinskim vrijednostima (pH). Većina boja su prašci koji su razrijeđeni u alkoholu.
Boje u kojima su kationi bojila nazivaju se bazične (pH veći od 7). Mogu se koristiti za bojenje mikroorganizama u crvenu (magenta, safranin), ljubičastu (metilljubičastu, tionin), plavu (metilensko plavo), zelenu (malahit zelena), smeđu (krizoidin) i crnu (indulin) boje.
Boje, u kojima su bojila anioni, nazivaju se kiselim (pH manji od 7). Oni će obojati uzorak u crveno (eozin), žuto (picrin) ili crno (nigrosin).
Postoji grupa neutralnih boja (na primjer, rodamin B), gdje i kationi i anioni djeluju kao bojila.
Kultura mrtva ili živa
Metode bojenja podijeljene su u dvije skupine prema životnom obliku uzorka za ispitivanje.
- Vitalno (doživotno) bojenje. Ova metoda proučavanja svojstava mikroorganizama koristi se u proučavanju živih tkiva, što omogućuje promatranje vitalnih procesa mikroba. Za ovo bojenje koriste se boje niske toksičnosti i velike prodorne moći.
- Post-vitalno bojenje. Ovo je bojenje mrtvih ili ubijenih mikroorganizama. Zahvaljujući tinktorijalnim svojstvima bakterija, mikrobiolozi određuju njihovu strukturu. Upravo se ovo bojenje najčešće koristi.
Gram-pozitivni i Gram-negativni
Upravo ove karakteristike bakterija možete pronaći u uputama za razne lijekove. Ova metoda proučavanja tinktorijalnih svojstava bakterija temelji se na korištenju gentian violet boje i fiksaciji joda. Ovo je tehnika Hansa Christiana Grama, danskog liječnika koji ju je predložio 1884. godine. Kao rezultat ovog bojenja, bakterije se dijele u dvije skupine:
- Gram (+) - postaje plavo(stafilokoki i streptokoki).
- Gram (-) - mrlja od ružičaste do crvene (enterobakterije, salmonela, E. coli).
Različiti rezultati bojenja su posljedica različitih tinktorijalnih svojstava bakterijskih stijenki. Metoda boje po Gramu i dalje je glavna u dijagnostici nekih zaraznih bolesti.
Druge tehnike bojenja
Okarakterizirajmo još nekoliko metoda koje se široko koriste u bakteriologiji.
- Ziehl-Nelsonova metoda - utvrđuje otpornost bakterija na kiselinu. Identificira uzročnike tuberkuloze i mikobakterioze.
- Tehnika Romanovsky-Giemsa - boji acidofilne (octene kiseline i mliječne kiseline) bakterije u crveno, a bazofilne (spirohete i protozoe) u plavo.
- Morozovljeva tehnika - mrlje bakterije u smeđe i čini njihove flagele vidljivima.
Spore se mogu vidjeti
Tsielovo bojenje fučinom omogućuje vam da vidite spore bakterija. Nakon bojenja imaju ružičastu boju, jasno su vidljive na pozadini plavih bakterija. Ova metoda je također bakteriološki alat i od velike je praktične važnosti.
